角膜营养不良症（CD）是一系列由角膜中物质异常沉积引起的罕见遗传性疾病，其临床表现通常为双眼角膜透明度逐渐丧失，导致复发性角膜糜烂和视力障碍。颗粒状角膜营养不良（GCD）是常见的CD亚型，由转化生长因子β诱导基因（TransformingGrowthFactorBetaInduced,TGFBI）突变导致[1]。TGFBI编码的TGFBIp蛋白参与细胞与胶原蛋白的相互作用，在细胞黏附、迁移和增殖中起关键作用。突变的TGFBIp沉积物会在角膜上皮和基质中异常聚集，影响角膜透明度和屈光度，从而损害视力[1-2]。

图1沉积物位于角膜前基质内的颗粒状角膜营养不良（GCD）患者眼部症状[2]

角膜营养不良（CD）亟需新治疗手段

角膜是眼睛前部的无血管透明组织，是光线聚焦到视网膜的起点，为眼睛提供三分之二的屈光力。角膜营养不良（CD）的病理组织学特征是角膜各层产生特异性物质堆积，常累及双眼，不同类型的CD可导致不同程度的视力损伤[3]。目前，角膜营养不良（CD）暂无治愈方法，角膜移植是主要的成熟治疗手段，但面临术后疾病复发、移植失败和并发症风险以及角膜移植组织来源短缺等问题。因此，利用基因疗法、再生疗法或细胞疗法等技术开发新型替代疗法将是未来的研究重点[3-4]。由于TGFBI相关角膜营养不良是最常见的亚型之一，TGFBI突变相关的角膜营养不良及其靶向疗法成为当前研究的重点方向。

图2正常和突变TGFBIp蛋白不同的运输和沉积模式[4]

TGFBI靶向疗法以RNA干扰和基因编辑为主

TGFBI编码的TGFBIp蛋白通过介导细胞黏附、迁移、增殖和分化，在多种生理和病理反应中发挥关键作用。TGFBIp在角膜、皮肤和结缔组织中均有表达，通过与胶原蛋白连接，为角膜细胞外基质提供支撑[5]。已知TGFBI突变可导致角膜异常物质堆积，抑制突变基因表达成为潜在治疗方向。SiSafLtd开发的RNA干扰疗法SIS--CD和CRISPRCas9基因编辑疗法SIS--CDC均通过抑制或编辑突变TGFBI基因来阻止突变蛋白的产生或聚集[6-7]。此外，最近的研究表明，TGFBI在各类癌症中异常表达，并在肿瘤免疫微环境中具有免疫抑制作用[8]。在肿瘤细胞增殖、血管生成和细胞凋亡中，TGFBI起着至关重要的作用，并能促进多种肿瘤的侵袭和转移[8-9]。因此，针对TGFBI的靶向治疗同样有望成为一种潜在的抗癌策略。

图3靶向突变TGFBI基因的基因编辑疗法的早期临床前细胞系研究[7]

RNA干扰和基因编辑疗法均作用于人源基因，考虑到动物和人在基因上的差异性，将小鼠基因进行人源化修饰将有助于加速靶向TGFBI的基因疗法进入临床阶段。赛业生物通过将小鼠Tgfbi基因序列替换为人类TGFBI基因序列，成功构建了B6-hTGFBI人源化小鼠（产品编号：C）。该模型成功表达人源TGFBI基因，发育正常且无异常眼部表型。此外，基于该模型，赛业生物还将进一步构建人源化点突变疾病模型，欢迎感兴趣的研究者咨询。以下是B6-hTGFBI小鼠的表型信息。

B6-hTGFBI小鼠成功表达人源TGFBI基因

纯合B6-hTGFBI小鼠的肝脏和眼部均成功表达人源TGFBI基因且不表达鼠源Tgfbi基因。

图4B6-hTGFBI小鼠和野生型小鼠（WT）肝脏和眼部基因表达检测

B6-hTGFBI小鼠眼部形态正常

纯合和杂合B6-hTGFBI小鼠眼部各组织形态与野生型小鼠相比均无明显差异，表明B6-hTGFBI小鼠的眼部表型正常。

图5眼底（Fundus）、视网膜光学相干断层扫描（OCT）、角膜（Cornea）和前房OCT检测

B6-hTGFBI小鼠视网膜光感功能正常

纯合和杂合B6-hTGFBI小鼠暗适应（Scotopic）和明适应（Photopic）ERG中a波和b波的振幅均与野生型小鼠保持一致，表明该小鼠视网膜光感受功能正常。

图6野生型小鼠（WT）和B6-hTGFBI小鼠视网膜电图（ERG）检测

总结

B6-hTGFBI小鼠（产品编号：C）成功表达人源TGFBI基因，不再表达鼠源Tgfbi基因，发育正常且无异常眼部表型。其眼部组织形态与野生型小鼠无明显差异，视网膜光感功能正常。因此，该小鼠是研究TGFBI相关角膜营养不良症（CD）的理想模型，可用于RNA干扰疗法和基因编辑疗法候选药物的筛选及临床前验证。

此外，赛业生物还基于该模型进一步构建了人源化点突变疾病模型，欢迎感兴趣的研究者咨询。我们也提供针对不同点突变的定制服务，以满足广大研发人员的需求。

HUGO-GT?全基因组人源化模型